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融膠液,可以使瓊脂糖凝膠完全融化。同時(shí)采用了一種新型的離子交換柱,在特定條件下,使DNA能在離心過(guò)柱的瞬間,結(jié)合到DNA純化柱上,在一定條件下又能將DNA充分洗脫,從而實(shí)現(xiàn)DNA的快速純化。
1.低熔點(diǎn)瓊脂糖挖塊法:在瓊脂糖主鏈導(dǎo)入羥乙基修飾后,其凝固點(diǎn)溫度降為30度,熔化溫度為65度,這一溫度低于絕大多數(shù)雙鏈DNA的變性溫度,利用這類凝膠純度高熔點(diǎn)低的特點(diǎn),在水平式瓊脂糖凝膠電泳上,使所需的目的DNA片段轉(zhuǎn)移到低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠內(nèi),經(jīng)65度水浴5-10分鐘,使之溶化,用飽和酚抽提,就可以分離到所需DNA.
2.玻璃棉離心法:利用玻璃棉為支持介質(zhì),通過(guò)離心,使含有目的基因DNA片段的溶液從凝膠中析出,經(jīng)離心管底部的小孔流入套管,再用酚純化、乙醇沉淀,獲得所需的目的基因片段。
3.透析袋電泳法:與常規(guī)瓊脂糖電泳原理相同,將含有目的基因片段的凝膠切下來(lái),裝入透析袋中,同時(shí)裝入電泳緩沖液,再按常規(guī)電泳方法電泳,讓DNA在透析袋內(nèi)走出凝膠塊,再純化緩沖液中的DNA片段。
4.DEAE纖維素紙片回收法:將這種紙片插入到瓊脂糖凝膠,其位置正好在回收的DNA條帶的前方,使DNA向紙片方向泳動(dòng)并吸附在紙片上,然后把紙片取出再用洗脫液洗脫吸附的DNA
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